Soluções Gerais

NOTE: For a listing of many reagents required to prepare the following solutions, see Standard Laboratory Chemicals. OBSERVAÇÃO: Para a lista de vários reagentes necessários para preparar a soluções abaixo, veja Produtos Químicos Laboratoriais Padrões

• Blotto A (para uso geral): 1x TBS, 5% leite, 0.05% Tween-20. Disponível na forma pré-medida (a href="/scbt/pt/p/tbs-blotto-a">sc-2333).
• Blotto B (para uso com anticorpos anti-fosfotirosinas): 1x TBS, 1% leite, 1% BSA, 0.05% Tween-20. Em alguns casos, pode-se omitir o leite, entretanto a falta do leite poderá resultar em baixo contraste (ou altos níveis de background). Disponível na forma pré-medida (sc-2335). Para todos os anticorpos fosfo-específicos: Acrescentar 0.01% (v/v) de cada coquetel inibidor de fosfatases, coquetéis A e B (sc-45044 and sc-45045)para inibir a ação das fosfatases.
• Tetrahidroclorito de Diaminobenzidina (DAB): Dissolva 5 mg DAB em 100 ml 100 mM Tris-HCl, pH 7.6, e acrescente 0.1 ml de peróxido de hidrogênio a 0.3% . Prepare a solução de DAB diariamente para que seja usada enquanto fresca.
• Solução-tampão para Eletroforese (2X): 100mM 2-(N-Morfolino)-ácido etanesulfônico (MES), 10 mM Na EDTA, 15% glicerol, 1.5% SDS, 0.3% Triton X-100, 100mM TCEP-HCL, 7.5 mM DTT, 0.0025% Azul de Bromofenol. Disponível na pré-medida (sc-24945).
• Solução-tampão salina de fosfato (1x TBS): 9.1 mM fosfato de sódio dibásico, 1.7 mM fosfato de sódio monobásico e 150 mM NaCl. Ajuste o pH a 7.4 com NaOH. Disponível na forma pré-medida líquida (sc-362185)ou em pó (sc-24947).
• Solução-tampão RIPA: 1x PBS, 1% Nonidet P-40 ou Igepal CA-630, 0.5% desoxicolato de sódio, 0.1% SDS. Essa solução poderá ser preparada em grandes volumes. Acrescente os inibidores no momento de uso da solução a partir das soluções de estoque abaixo. Disponíveis na forma pré-medida (sc-24948).
  1. 10 mg/ml PMSF (sc-3597) em isopropanol (acrescente em 10 µl/ml RIPA)
  2. Aprotinina (sc-3595) (acrescente em 50 KIU/ml RIPA)
  3. 100 mM ortovanadato de sódio (sc-3540) em alíquotas congeladas (acrescente em 10 µl/ml RIPA)
• Solução Subbing: 0.3% (w/v) gelatina, 0.05% sulfato de cromo e potássio em água destilada.
• Tris buffered saline (1x TBS): 10 mM Tris-HCl, pH 7.4; 150 mM NaCl (Tris: cat # sc-3715). Available pre-made in liquid (sc-24951) form.