9230105E10Rik Ativadores

Os activadores 9230105E10Rik comuns incluem, entre outros, a forskolina CAS 66575-29-9, o IBMX CAS 28822-58-4, o PMA CAS 16561-29-8, a isonomia CAS 56092-82-1 e o galato de (-)-epigalocatequina CAS 989-51-5.

A designação 9230105E10Rik Activators engloba uma classe de produtos químicos que podem induzir a atividade do gene 9230105E10Rik. A identificação destes activadores começa geralmente com uma estratégia de rastreio de alto rendimento (HTS), uma abordagem metódica que permite avaliar uma vasta biblioteca de compostos quanto à sua capacidade de modular a atividade genética. No caso dos activadores 9230105E10Rik, é normalmente utilizado um ensaio com um gene repórter. Isto implica a conceção de um sistema em que um gene repórter facilmente mensurável, geralmente codificando uma proteína que emite fluorescência ou luminescência, é colocado sob o controlo do promotor do gene 9230105E10Rik. Quando as células que contêm esta construção são expostas a vários compostos químicos, os que activam o promotor conduzem a um aumento da expressão do gene repórter, que pode ser detectado e quantificado. Os compostos que causam um aumento acentuado da atividade do repórter são identificados como potenciais activadores do gene 9230105E10Rik. Estes hits primários são então seleccionados para validação adicional para confirmar os seus efeitos activadores.

O seguimento do rastreio de alto rendimento consiste em confirmar e quantificar a regulação positiva do gene 9230105E10Rik pelos candidatos a activadores utilizando PCR quantitativo (qPCR). Esta técnica mede os níveis de ARNm transcritos a partir do gene 9230105E10Rik após a interação com os compostos. Um aumento observado nos níveis de ARNm do gene sugere que os compostos podem aumentar a expressão do gene a nível transcricional. Para correlacionar estes resultados com a síntese de proteínas, é efectuada uma análise Western blot. Esta técnica separa as proteínas dos lisados celulares utilizando eletroforese, transfere-as para uma membrana e, em seguida, sonda com anticorpos específicos para a proteína 9230105E10Rik. Um aumento detetável na intensidade da banda da proteína no Western blot, em comparação com os controlos, confirma a capacidade do composto não só para aumentar os níveis de ARNm, mas também para elevar a expressão da proteína correspondente. Coletivamente, estas técnicas moleculares fornecem um quadro robusto para avaliar e confirmar a atividade de compostos químicos como activadores do gene 9230105E10Rik, assegurando que os efeitos observados se devem a uma regulação positiva bona fide da expressão do gene, desde a transcrição até à produção de proteínas.