8430426H19Rik Aktivatoren

Gängige 8430426H19Rik Activators sind unter underem Forskolin CAS 66575-29-9, Ionomycin CAS 56092-82-1, PMA CAS 16561-29-8, Retinoic Acid, all trans CAS 302-79-4 und Adenosine 3',5'-cyclic monophosphate CAS 60-92-4.

8430426H19Rik-Aktivatoren ist eine chemische Klassifizierung für Verbindungen, die die Expression des 8430426H19Rik-Gens verstärken. Die Entdeckung und Validierung dieser Aktivatoren erfolgt über einen zweigleisigen experimentellen Ansatz. Zunächst wird ein Hochdurchsatz-Screening (HTS) eingesetzt, um umfangreiche chemische Bibliotheken auf der Suche nach aktiven Verbindungen zu durchforsten. Bei dieser Technik wird ein Reportergen-Assay eingesetzt, eine Methode, bei der ein Reportergen, das ein nachweisbares Signal wie Fluoreszenz oder Lumineszenz aussenden kann, unter die Kontrolle des Promotors des 8430426H19Rik-Gens gestellt wird. Wenn Zellen, die dieses Reporterkonstrukt enthalten, mit verschiedenen chemischen Verbindungen interagieren, führen diejenigen Verbindungen, die den Promotor aktivieren können, zu einem verstärkten Reportersignal. Diese Signalverstärkung dient als Indikator für die Fähigkeit der Verbindung, die Genexpression zu verstärken.

In einem weiteren Schritt wird mittels quantitativer PCR (qPCR) die Menge der mRNA von 8430426H19Rik in den Zellen genau quantifiziert. Ein durch qPCR nachgewiesener Anstieg der mRNA-Menge würde darauf hindeuten, dass die Verbindungen die Transkription des Gens tatsächlich stimulieren können. Um jedoch sicherzustellen, dass der Anstieg der mRNA zu einem entsprechenden Anstieg der Proteinkonzentration führt, wird eine Western-Blot-Analyse durchgeführt. Das Vorhandensein einer ausgeprägteren Proteinbande im Vergleich zu den Kontrollproben bestätigt, dass der Wirkstoff das Gen nicht nur auf der Transkriptions-, sondern auch auf der Translationsebene beeinflussen kann, was schließlich zu einem Anstieg des tatsächlichen Proteins führt.