Der Prozess der Identifizierung dieser Aktivatoren beginnt mit einem akribischen Ansatz, der ein Hochdurchsatz-Screening (HTS) beinhaltet. In dieser Phase werden umfangreiche Bibliotheken chemischer Substanzen sorgfältig in zellulären Assays getestet, um eine Hochregulierung der Genaktivität zu erkennen. Diese Assays werden auf raffinierte Weise konstruiert, indem der Promotor des Gens mit einem Reportersystem verbunden wird, z. B. mit fluoreszierenden oder lumineszierenden Markern, die das Expressionsniveau des Gens anzeigen können. Eine Verbindung, die das Gen 2010309E21Rik aktivieren kann, führt zu einem erhöhten Signal des Reporters, so dass der Grad der Aktivierung quantifiziert werden kann. Nachdem potenzielle Aktivatoren durch HTS identifiziert wurden, werden sie strengen Validierungstests unterzogen, um ihre Spezifität und Wirksamkeit bei der Hochregulierung des 2010309E21Rik-Gens zu ermitteln. Mit Hilfe der quantitativen Polymerase-Kettenreaktion (qPCR) werden die mRNA-Spiegel des Gens nach der Interaktion mit diesen chemischen Verbindungen gemessen, was quantitative Daten über ihren Einfluss auf die Genexpression auf der Transkriptionsstufe liefert. Ein signifikanter Anstieg der mRNA-Spiegel nach der Anwendung ist ein Hinweis auf eine Transkriptionsaktivierung.
Darüber hinaus werden die Auswirkungen der Aktivierung auf die Proteinsynthese mit Hilfe der Western-Blot-Technik bewertet. Diese Methode ermöglicht den Nachweis und die Quantifizierung des vom 2010309E21Rik-Gen kodierten Proteins. Ein übereinstimmender Anstieg sowohl der mRNA- als auch der Proteinkonzentration bei der Interaktion mit einer Verbindung ist eine überzeugende Bestätigung für die Rolle der Verbindung als Aktivator. Diese Validierungsmethoden sind nicht nur entscheidend für die Bestätigung der Ergebnisse des ersten HTS, sondern ermöglichen auch ein detailliertes Verständnis des Mechanismus, durch den diese Aktivatoren ihre Wirkung auf die Genexpression ausüben.
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Produkt | CAS # | Katalog # | Menge | Preis | Referenzen | Bewertung |
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Ionomycin, free acid | 56092-81-0 | sc-263405 sc-263405A | 1 mg 5 mg | $94.00 $259.00 | 2 | |
Ionomycin ist ein Calcium-Ionophor, das die intrazelluläre Calciumkonzentration erhöht. Diese Erhöhung des Calciumspiegels kann calciumabhängige Proteinkinasen oder andere calciumbindende Proteine aktivieren, was indirekt die Aktivität von 2010309E21Rik steigern könnte, wenn diese calciumabhängig ist. | ||||||
PMA | 16561-29-8 | sc-3576 sc-3576A sc-3576B sc-3576C sc-3576D | 1 mg 5 mg 10 mg 25 mg 100 mg | $40.00 $129.00 $210.00 $490.00 $929.00 | 119 | |
PMA ist ein Diacylglycerin (DAG)-Analogon, das die Proteinkinase C (PKC) aktiviert. PKC phosphoryliert Zielproteine, was zu einer Steigerung der 2010309E21Rik-Aktivität führen kann, wenn diese durch PKC-vermittelte Phosphorylierung reguliert wird. | ||||||
Retinoic Acid, all trans | 302-79-4 | sc-200898 sc-200898A sc-200898B sc-200898C | 500 mg 5 g 10 g 100 g | $65.00 $319.00 $575.00 $998.00 | 28 | |
Retinsäure wirkt durch Bindung an ihre Kernrezeptoren (RARs und RXRs), die die Genexpression regulieren. Wenn 2010309E21Rik unter der regulatorischen Kontrolle von Genen steht, die auf Retinsäure ansprechen, könnte seine Aktivität indirekt gesteigert werden. | ||||||
Adenosine 3′,5′-cyclic monophosphate | 60-92-4 | sc-217584 sc-217584A sc-217584B sc-217584C sc-217584D sc-217584E | 100 mg 250 mg 5 g 10 g 25 g 50 g | $114.00 $175.00 $260.00 $362.00 $617.00 $1127.00 | ||
Dibutyryl cAMP ist ein zellpermeables cAMP-Analogon, das PKA aktiviert. Diese Aktivierung kann zur Phosphorylierung von Proteinen führen und möglicherweise die Aktivität von 2010309E21Rik erhöhen, wenn es sich um ein PKA-Substrat handelt. | ||||||
(−)-Epigallocatechin Gallate | 989-51-5 | sc-200802 sc-200802A sc-200802B sc-200802C sc-200802D sc-200802E | 10 mg 50 mg 100 mg 500 mg 1 g 10 g | $42.00 $72.00 $124.00 $238.00 $520.00 $1234.00 | 11 | |
EGCG ist dafür bekannt, bestimmte Proteinkinasen zu hemmen. Wenn 2010309E21Rik durch eine Kinase negativ reguliert wird, die durch EGCG gehemmt wird, könnte seine Aktivität indirekt durch die Verringerung der inhibitorischen Phosphorylierung gesteigert werden. | ||||||
D-erythro-Sphingosine-1-phosphate | 26993-30-6 | sc-201383 sc-201383D sc-201383A sc-201383B sc-201383C | 1 mg 2 mg 5 mg 10 mg 25 mg | $162.00 $316.00 $559.00 $889.00 $1693.00 | 7 | |
S1P aktiviert S1P-Rezeptoren, die intrazelluläre Signalkaskaden auslösen können, darunter den PI3K/Akt-Signalweg. Wenn die Aktivität von 2010309E21Rik durch den PI3K/Akt-Signalweg verstärkt wird, könnte S1P indirekt seine Aktivität erhöhen. | ||||||
LY 294002 | 154447-36-6 | sc-201426 sc-201426A | 5 mg 25 mg | $121.00 $392.00 | 148 | |
LY294002 ist ein PI3K-Inhibitor. Wenn 2010309E21Rik Teil einer Signalkaskade ist, die durch PI3K-Aktivität negativ reguliert wird, könnte die Hemmung durch LY294002 diese negative Regulierung aufheben und die 2010309E21Rik-Aktivität steigern. | ||||||
Oligomycin A | 579-13-5 | sc-201551 sc-201551A sc-201551B sc-201551C sc-201551D | 5 mg 25 mg 100 mg 500 mg 1 g | $175.00 $600.00 $1179.00 $5100.00 $9180.00 | 26 | |
Oligomycin hemmt die ATP-Synthase, was zu einem Anstieg des intrazellulären ADP führt. Wenn 2010309E21Rik ADP benötigt oder durch Sensoren des zellulären Energiestatus reguliert wird, könnte Oligomycin die Aktivität von 2010309E21Rik indirekt verstärken. | ||||||
Zinc | 7440-66-6 | sc-213177 | 100 g | $47.00 | ||
Zinkchlorid kann die Aktivität verschiedener Zinkfingerproteine und Metalloenzyme modulieren. Wenn 2010309E21Rik eine zinkbindende Domäne besitzt oder durch zinksensitive Proteine reguliert wird, kann ZnCl2 seine Aktivität erhöhen. | ||||||
NAD+, Free Acid | 53-84-9 | sc-208084B sc-208084 sc-208084A sc-208084C sc-208084D sc-208084E sc-208084F | 1 g 5 g 10 g 25 g 100 g 1 kg 5 kg | $56.00 $186.00 $296.00 $655.00 $2550.00 $3500.00 $10500.00 | 4 | |
NAD+ ist ein Coenzym, das an Redoxreaktionen beteiligt ist. Wenn 2010309E21Rik Teil von Signalwegen ist, die durch das NAD+/NADH-Verhältnis reguliert werden, oder wenn es ADP-Ribosyltransferase-Aktivität aufweist, könnte NAD+ seine Aktivität verstärken. |