8430426H19Rik Attivatori

Gli attivatori 8430426H19Rik comuni includono, a titolo esemplificativo ma non esaustivo, la forskolina CAS 66575-29-9, l'ionomicina CAS 56092-82-1, il PMA CAS 16561-29-8, l'acido retinoico, tutti i trans CAS 302-79-4 e l'adenosina 3',5'-monofosfato ciclico CAS 60-92-4.

Gli attivatori 8430426H19Rik sono una classificazione chimica assegnata ai composti che risultano in grado di potenziare l'espressione del gene 8430426H19Rik. La scoperta e la validazione di questi attivatori comportano un approccio sperimentale su due fronti. Inizialmente, viene utilizzato lo screening ad alto rendimento (HTS) per setacciare ampie librerie chimiche alla ricerca di composti attivi. Questa tecnica impiega un saggio con gene reporter, un metodo in cui un gene reporter, in grado di emettere un segnale rilevabile come la fluorescenza o la luminescenza, è posto sotto il controllo del promotore del gene 8430426H19Rik. Quando le cellule contenenti questo costrutto reporter interagiscono con vari composti chimici, i composti in grado di attivare il promotore determinano un aumento del segnale del reporter. L'amplificazione del segnale serve come proxy della capacità del composto di aumentare l'espressione genica.

La fase successiva prevede l'uso della PCR quantitativa (qPCR) per quantificare con precisione la quantità di mRNA 8430426H19Rik nelle cellule. Un aumento dei livelli di mRNA rilevato dalla qPCR indicherebbe che i composti possono effettivamente stimolare la trascrizione del gene. Tuttavia, per garantire che l'aumento dell'mRNA si traduca in un corrispondente aumento dei livelli proteici, si ricorre all'analisi Western blot. La presenza di una banda proteica più pronunciata, rispetto ai campioni di controllo, conferma che il composto ha la capacità di influenzare il gene non solo a livello trascrizionale ma anche a livello traslazionale, culminando in un aumento della proteina vera e propria.