2500003M10Rik 活性化因子の場合、HTS の方法論の中心は、2500003M10Rik 遺伝子の転写活性に感度のあるレポーターアッセイ系である。通常、蛍光または発光シグナルを発するレポーター遺伝子を 2500003M10Rik 遺伝子の制御配列の下に配置する。スクリーニングされたライブラリーの化合物がこのプロモーターをうまく活性化すると、レポーター遺伝子の発現が誘発され、検出可能なシグナルが得られる。このシグナルの強さはプロモーターの活性、ひいては活性化因子としての化合物の可能性と相関する。HTSによって2500003M10Rik遺伝子の活性化因子候補が単離されると、その活性を確認するために一連のバリデーション・アッセイにかけられる。主な検証方法の一つは、定量的ポリメラーゼ連鎖反応(qPCR)であり、化合物との相互作用後の2500003M10Rik遺伝子のmRNAレベルを正確に定量することができる。
未処理のコントロールと比較してmRNA量の増加が観察されれば、その化合物が転写レベルで遺伝子発現を上昇させることができることを示している。さらに、mRNAの増加がタンパク質の産生に変換されることを確認するために、ウェスタンブロット分析が行われる。この技術は、2500003M10Rik遺伝子がコードする特定のタンパク質の可視化と定量化を可能にする。化合物を添加した細胞でより高いタンパク質レベルが存在すれば、化合物の活性化因子としての機能が証明されることになる。qPCRとウェスタンブロットのデータを統合することで、研究者は、化合物が単にmRNAレベルを増加させるだけでなく、対応するタンパク質の合成が確実に増強されることを確認することができる。これらの厳密な分析法は、転写からタンパク質合成までの遺伝子発現経路における化合物の効果を包括的に評価するために不可欠であり、それによって2500003M10Rik遺伝子に対する化合物の活性化特性の明確なプロファイルが確立される。
関連項目
| 製品名 | CAS # | カタログ # | 数量 | 価格 | 引用文献 | レーティング |
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(−)-Epigallocatechin Gallate | 989-51-5 | sc-200802 sc-200802A sc-200802B sc-200802C sc-200802D sc-200802E | 10 mg 50 mg 100 mg 500 mg 1 g 10 g | $42.00 $72.00 $124.00 $238.00 $520.00 $1234.00 | 11 | |
EGCGはキナーゼ阻害剤として作用し、競合的リン酸化を潜在的に減少させるため、2500003M10Rikをリン酸化するキナーゼの活性を選択的に高め、その活性を増加させる可能性があります。 | ||||||
LY 294002 | 154447-36-6 | sc-201426 sc-201426A | 5 mg 25 mg | $121.00 $392.00 | 148 | |
LY294002はPI3K阻害剤である。PI3Kを阻害することにより、AKTのような下流のシグナル伝達経路を変化させ、2500003M10Rikの活性を増強する代償機構を導く可能性がある。 | ||||||
Wortmannin | 19545-26-7 | sc-3505 sc-3505A sc-3505B | 1 mg 5 mg 20 mg | $66.00 $219.00 $417.00 | 97 | |
もう一つのPI3K阻害剤であるワートマンニンも同様にPI3K/ACT経路に影響を与え、シグナル伝達ネットワークを間接的に調節することで2500003M10Rikの活性を増強する変化をもたらす可能性がある。 | ||||||
SB 203580 | 152121-47-6 | sc-3533 sc-3533A | 1 mg 5 mg | $88.00 $342.00 | 284 | |
SB203580はp38 MAPK阻害剤です。p38を阻害することで、2500003M10Rikが関与する経路の細胞シグナル伝達バランスを変化させ、タンパク質の活性を高める可能性があります。 | ||||||
A23187 | 52665-69-7 | sc-3591 sc-3591B sc-3591A sc-3591C | 1 mg 5 mg 10 mg 25 mg | $54.00 $128.00 $199.00 $311.00 | 23 | |
A23187はカルシウムのイオノフォアとして働く。細胞内カルシウムが上昇すると、カルシウム依存性のシグナル伝達経路が活性化され、その結果、2500003M10Rikの活性が増強される可能性がある。 | ||||||
Staurosporine | 62996-74-1 | sc-3510 sc-3510A sc-3510B | 100 µg 1 mg 5 mg | $82.00 $150.00 $388.00 | 113 | |
幅広いキナーゼ阻害剤として、スタウロスポリンは2500003M10Rikを負に制御するキナーゼを阻害し、間接的にその活性を増加させる可能性がある。 | ||||||
D-erythro-Sphingosine-1-phosphate | 26993-30-6 | sc-201383 sc-201383D sc-201383A sc-201383B sc-201383C | 1 mg 2 mg 5 mg 10 mg 25 mg | $162.00 $316.00 $559.00 $889.00 $1693.00 | 7 | |
スフィンゴシン-1-リン酸はGタンパク質共役受容体を介して機能し、2500003M10Rikの活性を増強するシグナル伝達経路に影響を与える可能性がある。 | ||||||
Thapsigargin | 67526-95-8 | sc-24017 sc-24017A | 1 mg 5 mg | $94.00 $349.00 | 114 | |
タプシガルギンはSERCAポンプを阻害することによってカルシウムのホメオスタシスを破壊し、細胞質カルシウムを上昇させ、2500003M10Rikの活性を増強するシグナル伝達経路を活性化する可能性がある。 | ||||||
Genistein | 446-72-0 | sc-3515 sc-3515A sc-3515B sc-3515C sc-3515D sc-3515E sc-3515F | 100 mg 500 mg 1 g 5 g 10 g 25 g 100 g | $26.00 $92.00 $120.00 $310.00 $500.00 $908.00 $1821.00 | 46 | |
ゲニステインはチロシンキナーゼ阻害剤であり、2500003M10Rikに対するチロシンキナーゼの負の制御作用を緩和し、それによってその活性を高めることができる。 | ||||||