Quando um composto ativa com sucesso o promotor, induz a expressão do gene repórter, conduzindo a um sinal observável. A intensidade deste sinal está correlacionada com o nível de ativação do promotor e, por aproximação, com a eficácia do composto como ativador. Os compostos que causam um aumento significativo do sinal do repórter são então selecionados para uma avaliação mais detalhada. O processo de seleção é fundamental para isolar entidades químicas que possam modular eficazmente a expressão genética, proporcionando um ponto de partida para uma caraterização mais aprofundada. Após a fase inicial de HTS, os putativos activadores 2610003J06Rik são submetidos a uma série de testes de validação para confirmar as suas propriedades de ativação de genes. A reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) é uma das principais técnicas utilizadas nesta fase. Esta técnica quantifica os níveis de ARNm do gene 2610003J06Rik após a interação do composto, sendo que um aumento do ARNm significa que o composto pode aumentar a expressão do gene a nível transcricional. Complementando a qPCR, é efectuada uma análise Western blot para determinar se o aumento observado nos níveis de ARNm se traduz num aumento da proteína codificada pelo gene. Esta técnica envolve a separação de proteínas por eletroforese em gel, a sua transferência para uma membrana e, em seguida, a sondagem com anticorpos específicos da proteína alvo. Estas etapas de validação - qPCR e Western blot - são indispensáveis no processo de caraterização, uma vez que asseguram coletivamente que um composto químico não só aumenta a transcrição do gene 2610003J06Rik, mas também conduz a um aumento correspondente na síntese de proteínas. Esta abordagem a vários níveis garante que o papel de um composto como ativador é completamente fundamentado por provas em diferentes níveis de regulação da expressão genética.
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Nome do Produto | CAS # | Numero de Catalogo | Quantidade | Preco | Uso e aplicacao | NOTAS |
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IBMX | 28822-58-4 | sc-201188 sc-201188B sc-201188A | 200 mg 500 mg 1 g | $159.00 $315.00 $598.00 | 34 | |
O IBMX é um inibidor inespecífico das fosfodiesterases, conduzindo a um aumento dos níveis de AMPc e GMPc. Isto potencia as vias da PKA e da PKG, aumentando potencialmente a atividade do 2610003J06Rik através de eventos de fosforilação. | ||||||
PMA | 16561-29-8 | sc-3576 sc-3576A sc-3576B sc-3576C sc-3576D | 1 mg 5 mg 10 mg 25 mg 100 mg | $40.00 $129.00 $210.00 $490.00 $929.00 | 119 | |
O PMA é um ativador da PKC que pode aumentar a atividade da 2610003J06Rik através da ativação da proteína quinase C, que pode então influenciar as vias de sinalização ou os elementos estruturais associados à função da 2610003J06Rik. | ||||||
A23187 | 52665-69-7 | sc-3591 sc-3591B sc-3591A sc-3591C | 1 mg 5 mg 10 mg 25 mg | $54.00 $128.00 $199.00 $311.00 | 23 | |
O A23187 é um ionóforo de cálcio que aumenta os níveis de cálcio intracelular, potencialmente potenciando a atividade da 2610003J06Rik através de vias de sinalização dependentes do cálcio que interagem com a proteína ou modificam a sua função. | ||||||
Ionomycin | 56092-82-1 | sc-3592 sc-3592A | 1 mg 5 mg | $76.00 $265.00 | 80 | |
A ionomicina actua como um ionóforo de cálcio, à semelhança do A23187, aumentando o cálcio intracelular e activando as cinases dependentes do cálcio, o que poderia levar à ativação do 2610003J06Rik. | ||||||
(−)-Epigallocatechin Gallate | 989-51-5 | sc-200802 sc-200802A sc-200802B sc-200802C sc-200802D sc-200802E | 10 mg 50 mg 100 mg 500 mg 1 g 10 g | $42.00 $72.00 $124.00 $238.00 $520.00 $1234.00 | 11 | |
Sabe-se que a EGCG inibe certos tipos de proteínas cinases, alterando potencialmente as vias de sinalização para favorecer a ativação da 2610003J06Rik através da redução de sinais reguladores competitivos ou negativos. | ||||||
LY 294002 | 154447-36-6 | sc-201426 sc-201426A | 5 mg 25 mg | $121.00 $392.00 | 148 | |
O LY294002 é um inibidor da PI3K, que pode modular a via PI3K/Akt, aliviando potencialmente o controlo inibitório das vias de que o 2610003J06Rik faz parte, aumentando assim a sua atividade. | ||||||
SB 203580 | 152121-47-6 | sc-3533 sc-3533A | 1 mg 5 mg | $88.00 $342.00 | 284 | |
O SB203580 é um inibidor da p38 MAPK, que pode alterar o equilíbrio da sinalização celular para vias que aumentam indiretamente a atividade da 2610003J06Rik, através da inibição de vias concorrentes de resposta ao stress. | ||||||
Spermine | 71-44-3 | sc-212953A sc-212953 sc-212953B sc-212953C | 1 g 5 g 25 g 100 g | $60.00 $192.00 $272.00 $883.00 | 1 | |
A espermina é uma poliamina que pode modular a função dos canais iónicos e pode influenciar as vias de sinalização que regulam ou interagem com o 2610003J06Rik, levando ao aumento da sua atividade. | ||||||
Zaprinast (M&B 22948) | 37762-06-4 | sc-201206 sc-201206A | 25 mg 100 mg | $103.00 $245.00 | 8 | |
O zaprinast inibe as fosfodiesterases, particularmente a PDE5, levando a um aumento dos níveis de GMPc, o que poderia aumentar a atividade do 2610003J06Rik através da ativação da proteína quinase dependente do GMPc. | ||||||
Y-27632, free base | 146986-50-7 | sc-3536 sc-3536A | 5 mg 50 mg | $182.00 $693.00 | 88 | |
O Y-27632 é um inibidor da ROCK, que pode levar a alterações na dinâmica do citoesqueleto e nas vias de motilidade celular, aumentando potencialmente a atividade do 2610003J06Rik se este estiver envolvido nestes processos. |