von Willebrand Factor/VWF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423690

Visão geral

Vwf codifica o fator de von Willebrand (VWF), uma grande glicoproteína multimérica sintetizada por células endoteliais e megacariócitos e armazenada nos corpos de Weibel–Palade e nos grânulos α das plaquetas. O VWF medeia a adesão e a agregação plaquetária sob alta tensão de cisalhamento, ao fazer a ponte entre o colágeno subendotelial exposto e a glicoproteína plaquetária Ib/IX/V, e estabiliza o fator VIII da coagulação na circulação. Sua secreção regulada e o processamento dos multímeros integram a ativação endotelial, as interações com a matriz extracelular e redes de proteases hemostáticas que coordenam a hemostasia primária. A desregulação da quantidade de VWF, da distribuição de multímeros ou de sua depuração perturba o equilíbrio trombo-inflamatório e está associada a fenótipos hemorrágicos e trombóticos relevantes para modelos de lesão vascular, inflamação e disfunção endotelial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO von Willebrand Factor/VWF (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Vwf em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Vwf, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Vwf na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína von Willebrand Factor/VWF.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Vwf para a investigação da sinalização de von Willebrand Factor/VWF, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Vwf críticos para a função von Willebrand Factor/VWF
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Vwf para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo von Willebrand Factor/VWF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo von Willebrand Factor/VWF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Vwf. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo von Willebrand Factor/VWF Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR von Willebrand Factor/VWF (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Vwf para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Vwf definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.