Vigilin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431035

Visão geral

O gene Hdlbp de camundongo codifica a vigilina, uma grande proteína ligante de RNA com múltiplos domínios KH que se associa a mRNAs e a complexos ribonucleoproteicos para influenciar a estabilidade, a localização e a tradução dos transcritos. A vigilina tem sido associada à regulação da expressão de genes do metabolismo de lipídios e esteróis por meio de interações com mRNAs específicos, conectando-a a vias mais amplas que controlam o balanço energético celular e a homeostase de membranas. Ela também participa do controle gênico pós-transcricional durante a proliferação e respostas ao estresse, em consonância com funções no processamento de RNA e na regulação da tradução. A desregulação de redes de RNA associadas à vigilina tem sido investigada em contextos que envolvem fenótipos metabólicos e programas de expressão gênica alterados, relevantes para mecanismos de doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Vigilin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Hdlbp em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Hdlbp, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Hdlbp na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Vigilin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Hdlbp para a investigação da sinalização de Vigilin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Hdlbp críticos para a função Vigilin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Hdlbp para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Vigilin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Vigilin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Hdlbp. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Vigilin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Vigilin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Hdlbp para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Hdlbp definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.