VEGF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423665

Descripción general

Vegfa codifica el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), una citocina secretada que impulsa la proliferación, migración y supervivencia de las células endoteliales durante la vasculogénesis embrionaria y la angiogénesis posnatal. La señalización de VEGF actúa principalmente a través de VEGFR2 para activar las vías PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLCγ–PKC y del óxido nítrico, coordinando la permeabilidad vascular y las respuestas de perfusión tisular a la hipoxia mediante una regulación dependiente de HIF. En modelos murinos, las alteraciones en la dosis de Vegfa afectan el patrón de los vasos, la reparación de heridas y la remodelación tisular inflamatoria. La señalización desregulada de VEGF se estudia ampliamente en contextos como la angiogénesis asociada a tumores, la neovascularización retiniana y la adaptación vascular relacionada con isquemia, sin que ello implique resultados terapéuticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VEGF (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vegfa en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vegfa junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vegfa tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VEGF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vegfa para la investigación de la señalización de VEGF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Vegfa críticos para la función de VEGF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vegfa para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VEGF CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VEGF CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vegfa. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VEGF (m) y el plásmido HDR VEGF (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vegfa para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vegfa definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.