ValRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423653

Übersicht

Vars kodiert die Valyl‑tRNA‑Synthetase (ValRS), eine zytosolische Aminoacyl‑tRNA‑Synthetase, die Valin an die dazugehörige tRNA koppelt und damit die Genauigkeit der Translation sowie die Homöostase des Proteoms sicherstellt. Durch die Aufrechterhaltung einer korrekten Decodierung während der Proteinsynthese unterstützt ValRS zentrale Prozesse, darunter die Ribosomenfunktion, integrierte Stressantworten auf ein Ungleichgewicht von Aminosäuren und umfassendere Proteostase‑Netzwerke. Störungen der Aminoacyl‑tRNA‑Beladung können Zellwachstum und Stressanpassung beeinträchtigen und verknüpfen diesen Signalweg mit Mechanismen, die für die Neuroentwicklung, die neuromuskuläre Biologie und die mitochondriale–zytosolische Koordination relevant sind, etwa über einen veränderten Bedarf an Proteomleistung.

Das ValRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vars-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vars-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vars nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ValRS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vars-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ValRS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vars-Exone abzielen, die für die ValRS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vars-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ValRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ValRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vars-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ValRS HDR-Plasmid (m) und ValRS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vars-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vars-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.