Plasmide CRISPR/Cas9 KO UPIb (m): sc-423620

Présentation

Upk1b code l’uroplakine Ib (UPIb), une protéine membranaire de type tétraspanine qui s’assemble avec d’autres uroplakines pour former les plaques membranaires asymétriques (AUM) des cellules parapluie urothéliales différenciées. Ces plaques soutiennent l’organisation de la membrane apicale, l’intégrité de la barrière et les processus de trafic vésiculaire qui régulent le remodelage de la surface vésicale lors de l’étirement et de la miction. UPIb participe aux programmes de différenciation épithéliale et à l’organisation des microdomaines membranaires, reliant l’architecture du cytosquelette à la stabilité des jonctions et des protéines de surface. Les modifications des profils d’expression des uroplakines sont largement utilisées comme indicateurs de l’état de l’urothélium et sont pertinentes pour l’étude de la dysfonction de barrière, de l’inflammation et de la transformation urothéliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UPIb (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Upk1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Upk1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Upk1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UPIb.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Upk1b pour l'étude de la signalisation de UPIb, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Upk1b essentiels à la fonction de UPIb
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Upk1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UPIb plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UPIb plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Upk1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UPIb plasmide HDR (m) et le UPIb (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Upk1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Upk1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.