UFD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423598

Übersicht

Ufd1l kodiert UFD1, eine zentrale Komponente des UFD1–NPL4–VCP/p97-Segregase-Komplexes, der polyubiquitinierte Substrate erkennt und für die nachgelagerte Verarbeitung durch das Ubiquitin-Proteasom-System extrahiert. Durch die Kopplung von Ubiquitin-Signalen an ATP-abhängiges Protein-Remodeling unterstützt UFD1 den ER-assoziierten Abbau (ERAD), die Qualitätskontrolle fehlgefalteter Proteine und die Proteostase unter zellulärem Stress. Dieser Signalweg ist zudem mit der Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten und der Regulation von Transkriptionsprogrammen über den kontrollierten Abbau wichtiger Regulatoren verknüpft. Eine Fehlregulation von p97-Kofaktoren und ERAD-Komponenten wurde mit Phänotypen proteotoxischen Stresses sowie mit Kontexten der Neurodegeneration und Entwicklungsbiologie in Verbindung gebracht, was Ufd1l zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien in Mausmodellen macht.

Das UFD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ufd1l-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ufd1l-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ufd1l nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UFD1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ufd1l-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UFD1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ufd1l-Exone abzielen, die für die UFD1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ufd1l-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UFD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UFD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ufd1l-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UFD1 HDR-Plasmid (m) und UFD1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ufd1l-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ufd1l-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.