UCK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423608

Übersicht

Uck1 kodiert die Uridin-Cytidin-Kinase 1 (UCK1), ein zytosolisches Enzym des Salvage‑Stoffwechselwegs, das Uridin und Cytidin zu UMP bzw. CMP phosphoryliert und damit Pyrimidinnukleotide für die RNA-Synthese, DNA-Replikation und den Membranphospholipidstoffwechsel bereitstellt. Durch die Regulation des Gleichgewichts der Nukleotidpools beeinflusst UCK1 die proliferative Kapazität, den Zellzyklusverlauf sowie Stressantworten, die mit Replikations- und transkriptionellem Bedarf verknüpft sind. In Mausmodellen wird die UCK1-Aktivität häufig zusammen mit der de‑novo‑Pyrimidinsynthese und dem Nukleosidtransport untersucht, um metabolische Umprogrammierung und kompensatorische Flüsse innerhalb der Nukleotidhomöostase zu verstehen. Veränderte Pyrimidin-Stoffwechselwege sind ein wiederkehrendes Merkmal von Erkrankungen mit dysregulierter Proliferation und beeinträchtigter Genomstabilität, wodurch Uck1 ein nützlicher Ansatzpunkt für pfadorientierte mechanistische Studien ist.

Das UCK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Uck1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Uck1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Uck1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UCK1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Uck1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UCK1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Uck1-Exone abzielen, die für die UCK1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Uck1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UCK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UCK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Uck1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UCK1 HDR-Plasmid (m) und UCK1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Uck1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Uck1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.