UBC12 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423575

Descripción general

Ube2m codifica UBC12, una enzima conjugadora E2 que transfiere NEDD8 a los andamios de cullina, lo que permite la activación de las ligasas de ubiquitina cullina–RING (CRL) y un control amplio de la proteostasis. Mediante la regulación de la ubiquitinación dependiente de CRL, UBC12 influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, la transducción de señales y la adaptación al estrés al modular el recambio de proteínas reguladoras clave. La alteración de la neddilación puede desestabilizar la homeostasis proteica y el control de los puntos de control, vinculando la función de Ube2m/UBC12 con vías que se investigan con frecuencia en biología del cáncer, neurobiología y señalización inflamatoria. En sistemas murinos, los estudios de pérdida de función de Ube2m respaldan el análisis mecanístico de las redes de modificaciones tipo ubiquitina y su contribución al desarrollo tisular y a fenotipos relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBC12 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ube2m en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ube2m junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ube2m tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBC12.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ube2m para la investigación de la señalización de UBC12, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ube2m críticos para la función de UBC12
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ube2m para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UBC12 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UBC12 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ube2m. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBC12 (m) y el plásmido HDR UBC12 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ube2m para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ube2m definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.