Tropomyosin α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423481
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Tropomyosin α O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Tropomyosin α, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Tropomyosin α Anticorpo (F-6): sc-376541
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Tropomyosin α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423481 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene **Tpm1** de camundongo codifica a **tropomiosina α**, uma proteína em hélice dupla (coiled-coil) que se liga à actina, estabiliza a actina filamentosa e especifica a função actomiosina ao regular o acesso da miosina à actina. A tropomiosina α contribui para a arquitetura do citoesqueleto, a formação de fibras de estresse e a dinâmica contrátil que molda a adesão celular, a migração e a mecanotransdução. Por seu papel na organização dos filamentos de actina, **TPM1** se conecta a vias que governam a remodelação da actina sarcomérica e não muscular, incluindo a regulação do citoesqueleto dependente de GTPases da família Rho. Alterações no equilíbrio de isoformas de tropomiosina e na regulação da actina dependente de **TPM1** têm sido associadas a defeitos na função muscular e a uma desregulação mais ampla do citoesqueleto, relevante para modelos de cardiomiopatia e de motilidade de células tumorais.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin α (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tpm1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tpm1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tpm1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Tropomyosin α.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tpm1 para a investigação da sinalização de Tropomyosin α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tpm1 críticos para a função Tropomyosin α
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tpm1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Tropomyosin α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Tropomyosin α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tpm1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Tropomyosin α Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Tropomyosin α (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tpm1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tpm1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.