TorsinA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424414
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TorsinA O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TorsinA, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TorsinA Anticorpo (D-7): sc-373915
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TorsinA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424414 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Tor1a codifica a torsinaA, uma ATPase AAA+ que se localiza no retículo endoplasmático e no envelope nuclear, onde contribui para a integridade do envelope nuclear, para a proteostase e para o remodelamento associado a membranas por meio de interações com LAP1 e LULL1. Em células de camundongo, a atividade da torsinaA está ligada à regulação do transporte nucleocitoplasmático, às respostas ao estresse do retículo endoplasmático e ao controle de qualidade de proteínas mal dobradas. A disfunção de TOR1A está associada a disfunção neuronal e a fenótipos relacionados à distonia, tornando-a relevante para estudos de biologia de circuitos motores e adaptação celular ao estresse. Tor1a também é usado como um lócus modelo para investigar como perturbações do envelope nuclear influenciam o acoplamento ao citoesqueleto e o tráfego intracelular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TorsinA (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tor1a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tor1a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tor1a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TorsinA.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tor1a para a investigação da sinalização de TorsinA, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tor1a críticos para a função TorsinA
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tor1a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TorsinA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TorsinA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tor1a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TorsinA Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TorsinA (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tor1a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tor1a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.