Plasmide CRISPR/Cas9 KO TOB1 (m): sc-423508

Présentation

Tob1 code TOB1, un membre de la famille BTG/TOB à activité antiproliférative, qui agit comme corégulateur transcriptionnel de réponse immédiate (« immediate-early ») et module la progression du cycle cellulaire. TOB1 est régulé par une phosphorylation dépendante des MAPK et s’interface avec les programmes transcriptionnels des SMAD pour façonner les sorties de signalisation du TGF-β, notamment en influençant la différenciation et la limitation de la croissance. Dans les cellules immunitaires, TOB1 contribue au maintien des seuils d’activation et de la tolérance en atténuant l’activation des lymphocytes T et la production de cytokines, ce qui le relie aux voies contrôlant l’homéostasie immunitaire. Une activité de TOB1 altérée a été associée à une prolifération dérégulée et à des phénotypes liés à l’immunité, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation oncogénique, de l’inflammation et du remodelage tissulaire dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TOB1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tob1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tob1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tob1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TOB1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tob1 pour l'étude de la signalisation de TOB1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tob1 essentiels à la fonction de TOB1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tob1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TOB1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TOB1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tob1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TOB1 plasmide HDR (m) et le TOB1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tob1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tob1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.