TLE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423413

Übersicht

Tle2 kodiert den transkriptionellen Korepressor TLE2, ein Protein der Groucho/TLE-Familie, das repressive Chromatin-Komplexe als Gerüst organisiert, um kontextabhängige Genexpressionsprogramme während der Entwicklung und der Gewebehomöostase zu modulieren. TLE2 interagiert mit sequenzspezifischen Transkriptionsfaktoren und integriert Signale aus Signalwegen wie Wnt/β-Catenin und Notch, wodurch Zellschicksalsentscheidungen, Differenzierung sowie die Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen geprägt werden. In Mausmodellen und zellulären Systemen kann eine veränderte TLE2-Aktivität die Linienfestlegung und die Kontrolle der Proliferation stören, was es für die Untersuchung von Mechanismen relevant macht, die fehlregulierten transkriptionellen Netzwerken bei Entwicklungsstörungen und krebsassoziierten Signalwegen zugrunde liegen. Seine nuklearen Korepressor-Funktionen machen es zudem zu einem nützlichen Knotenpunkt, um epigenetische Regulation und die Dynamik transkriptioneller Repression zu analysieren.

Das TLE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tle2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tle2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tle2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TLE2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tle2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TLE2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tle2-Exone abzielen, die für die TLE2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tle2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TLE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TLE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tle2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TLE2 HDR-Plasmid (m) und TLE2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tle2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tle2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.