Plasmide CRISPR/Cas9 KO SYND3/SDC3/Syndecan-3 (m): sc-423236

Présentation

Sdc3 code le syndécane‑3 (SYND3/SDC3), un protéoglycane transmembranaire à héparane sulfate qui organise, à la surface cellulaire, les signaux de la matrice extracellulaire et les gradients de facteurs de croissance. En se liant à des ligands dépendants de l’héparane sulfate, SDC3 module la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase et des chimiokines, influençant le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire, la croissance des neurites et la plasticité synaptique. Chez la souris, Sdc3 est fortement exprimé dans des tissus neuronaux et métaboliques et contribue à des voies impliquées dans le guidage axonal, l’adhésion cellule–matrice et la signalisation inflammatoire. Une fonction dérégulée du syndécane‑3 a été associée à des processus neurodéveloppementaux et neuroinflammatoires, ainsi qu’à des phénotypes d’altération de l’équilibre énergétique, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur le SNC et le métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SYND3/SDC3/Syndecan-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sdc3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sdc3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sdc3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SYND3/SDC3/Syndecan-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sdc3 pour l'étude de la signalisation de SYND3/SDC3/Syndecan-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sdc3 essentiels à la fonction de SYND3/SDC3/Syndecan-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sdc3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SYND3/SDC3/Syndecan-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SYND3/SDC3/Syndecan-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sdc3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SYND3/SDC3/Syndecan-3 plasmide HDR (m) et le SYND3/SDC3/Syndecan-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sdc3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sdc3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.