STC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423183

Übersicht

Stc2 kodiert Stanniocalcin 2 (STC2), ein sekretiertes Glykoprotein, das an der Homöostase von Calcium und Phosphat sowie an der zellulären Anpassung an metabolischen und mikroenvironmentalen Stress beteiligt ist. In Mauszellen wird die STC2-Expression durch stressresponsive Signalwege reguliert und häufig mit endoplasmatischem-Retikulum-Stress und Programmen der „Unfolded Protein Response“ (UPR) in Verbindung gebracht, was das Überleben unter Hypoxie oder Nährstoffmangel unterstützt. STC2 wurde außerdem mit der Modulation von Wachstumsfaktorsignalen, dem Redoxgleichgewicht und der Proteostase verknüpft und stellt damit einen funktionellen Knotenpunkt in Signalwegen dar, die Proliferation und Differenzierung beeinflussen. Eine veränderte STC2-Aktivität wurde in unterschiedlichsten krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, darunter krebsassoziierte Phänotypen, inflammatorischer Stress und metabolische Dysregulation, wodurch Stc2 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in Säugermodellen ist.

Das STC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Stc2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Stc2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Stc2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die STC2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Stc2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der STC2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Stc2-Exone abzielen, die für die STC2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Stc2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom STC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom STC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Stc2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das STC2 HDR-Plasmid (m) und STC2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Stc2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Stc2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.