Plasmide CRISPR/Cas9 KO StAR (h): sc-400961

Présentation

STAR code la protéine StAR (steroidogenic acute regulatory protein), un facteur associé à la membrane mitochondriale qui assure le transfert, étape limitante, du cholestérol de la membrane externe vers la membrane interne de la mitochondrie afin d’initier la biosynthèse des hormones stéroïdiennes. Ce processus soutient la production de prégnénolone par CYP11A1 et s’intègre à la signalisation cAMP/PKA, à la dynamique mitochondriale et au trafic lipidique dans les cellules stéroïdogènes des glandes surrénales et des gonades. La perturbation du transport du cholestérol dépendant de StAR dérègle la stéroïdogenèse et modifie en aval les programmes transcriptionnels régulés par le système endocrinien ainsi que les réponses cellulaires au stress. Des variants ou la perte de fonction de STAR sont associés à des phénotypes d’insuffisance stéroïdogène surrénalienne congénitale, faisant de StAR une cible majeure pour les études mécanistiques portant sur la gestion mitochondriale du cholestérol et le contrôle des voies de la stéroïdogenèse.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO StAR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STAR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STAR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STAR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine StAR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STAR pour l'étude de la signalisation de StAR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STAR essentiels à la fonction de StAR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STAR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le StAR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le StAR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STAR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le StAR plasmide HDR (h) et le StAR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STAR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STAR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.