SAP 49 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-407057-KO-2

Übersicht

SF3B4 kodiert den Splicing-Faktor 3B, Untereinheit 4 (SAP 49), eine zentrale Komponente des U2-snRNP innerhalb des SF3b-Komplexes, der die präzise Erkennung des Branchpoints und der 3′-Spleißstelle beim Prä-mRNA-Spleißen fördert. Indem SAP 49 den Aufbau und die Stabilisierung der Spleißosomen-Komplexe A und B unterstützt, beeinflusst es die Auswahl von Transkript-Isoformen und trägt zu koordinierten Genexpressionsprogrammen bei, die mit Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten und Differenzierung verknüpft sind. Eine Störung der Spleißosomen-Fidelity kann weitreichende Veränderungen des alternativen Spleißens und ein Remodelling des Proteoms auslösen, wodurch SF3B4 ein geeigneter Knotenpunkt für die Untersuchung von RNA-Prozessierungsnetzwerken in menschlichen Zellen ist. Veränderte SF3B4-Expression und Spleißosomen-Dysfunktion wurden mit pathologischen Zuständen in Verbindung gebracht, in denen aberrantes Spleißen zu zellulären Stressantworten und dysreguliertem Wachstum beiträgt.

Das SAP 49 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SF3B4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SF3B4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SF3B4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SAP 49-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SF3B4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SAP 49-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SF3B4-Exone abzielen, die für die SAP 49-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SF3B4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SAP 49 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SAP 49 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SF3B4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SAP 49 HDR-Plasmid (h) und SAP 49 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SF3B4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SF3B4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.