RPA40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404594

Übersicht

POLR1C kodiert RPA40, eine gemeinsame Untereinheit der RNA-Polymerase I und der RNA-Polymerase III, die den Zusammenbau und die Stabilität dieser Transkriptionskomplexe unterstützt. Über seine Funktionen in der rRNA-Synthese durch Pol I sowie in der Transkription von tRNAs und anderen kleinen nichtkodierenden RNAs durch Pol III trägt RPA40 zur Ribosomenbiogenese, zur Proteostase und zur Kontrolle des Zellwachstums bei. Eine Störung der mit POLR1C verknüpften Transkriptionsleistung kann die nukleoläre Funktion und zelluläre Stressantworten verändern und verbindet diesen Faktor mit Signalwegen, die Proliferation und Differenzierung beeinflussen. Varianten in POLR1C wurden mit erblichen Erkrankungen in Zusammenhang gebracht, die die Myelinisierung und die kraniofaziale Entwicklung betreffen, was die Bedeutung der Integrität von Pol I/III in der menschlichen Biologie unterstreicht.

Das RPA40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POLR1C-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POLR1C-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POLR1C nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RPA40-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POLR1C-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RPA40-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POLR1C-Exone abzielen, die für die RPA40-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POLR1C-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RPA40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RPA40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POLR1C-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RPA40 HDR-Plasmid (h) und RPA40 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POLR1C-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POLR1C-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.