RORβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432582

Descripción general

Rorb codifica el receptor nuclear RORβ (receptor huérfano beta relacionado con el receptor del ácido retinoico), un factor de transcripción regulado por ligando que se une a elementos de respuesta a ROR para controlar programas de expresión génica específicos de cada tipo celular. En el ratón, RORβ está enriquecido en el sistema nervioso central y la retina, donde contribuye a la diferenciación neuronal, el patrón laminar, los ritmos transcripcionales vinculados al ciclo circadiano y las redes génicas relacionadas con los fotorreceptores. Como miembro del eje ROR/REV-ERB, se integra con vías transcripcionales del desarrollo y del metabolismo que moldean la identidad neuronal y la función sináptica. Las alteraciones en la regulación dependiente de RORβ se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y sensoriales, lo que respalda su uso en estudios sobre la formación de circuitos neuronales y la biología de la retina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RORβ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rorb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rorb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rorb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RORβ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rorb para la investigación de la señalización de RORβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rorb críticos para la función de RORβ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rorb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RORβ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RORβ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rorb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RORβ (m) y el plásmido HDR RORβ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rorb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rorb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.