Rock-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400367

Panoramica

ROCK1 codifica la proteina chinasi 1 associata a Rho con dominio coiled-coil (Rock-1), una chinasi serina/treonina che agisce come principale effettore di RhoA per regolare la contrattilità actomiosinica e il rimodellamento del citoscheletro. Rock-1 fosforila substrati chiave che controllano la formazione delle fibre di stress, la dinamica delle adesioni focali e l’attività della catena leggera della miosina, collegando la segnalazione Rho/ROCK alla forma cellulare, alla motilità, all’adesione e alla citocinesi. Attraverso questi processi, ROCK1 contribuisce alla meccanotrasduzione e all’architettura tissutale, e la sua deregolazione è stata associata ad alterazioni del comportamento invasivo e a risposte vascolari e fibrotiche anomale nella biologia delle malattie. ROCK1 è inoltre implicato in contesti di apoptosi e di segnalazione infiammatoria, rendendolo un nodo rilevante per analizzare il cross-talk tra vie di segnalazione in diversi modelli cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rock-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ROCK1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ROCK1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ROCK1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rock-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ROCK1 per lo studio della segnalazione di Rock-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ROCK1 critici per la funzione di Rock-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ROCK1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rock-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rock-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ROCK1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rock-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rock-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ROCK1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ROCK1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.