RIP/Rab Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405836

Descripción general

AGFG1 (RIP/Rab) codifica una ArfGAP con repeticiones FG que acopla el tráfico de membranas con la endocitosis mediada por clatrina y la clasificación endosomal. RIP/Rab interactúa con componentes de la maquinaria endocítica y contribuye a la internalización de receptores, la gemación de vesículas y el reciclaje de carga, vinculando la dinámica de membranas regulada por GTPasas con la organización del citoesqueleto. A través de estas funciones, AGFG1 influye en el recambio de la señalización y en las vías de homeostasis proteica, que con frecuencia se ven alteradas en estados proliferativos y de adaptación al estrés. La desregulación de los programas de endocitosis y tráfico en los que participa AGFG1 se ha asociado con contextos relevantes para la biología del cáncer y las interacciones huésped–patógeno, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RIP/Rab (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AGFG1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AGFG1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AGFG1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RIP/Rab.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AGFG1 para la investigación de la señalización de RIP/Rab, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AGFG1 críticos para la función de RIP/Rab
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AGFG1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AGFG1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RIP/Rab (h) y el plásmido HDR RIP/Rab (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AGFG1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AGFG1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.