Ribosomal Protein LP0 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419183

Visão geral

Rplp0 codifica a proteína ribossômica LP0 (P0), um componente central da subunidade ribossômica grande 60S que forma o “stalk” (haste) ribossômico com as proteínas P1/P2 e auxilia o recrutamento de fatores de tradução e a ativação de GTPases durante o alongamento. Como proteína ribossômica conservada e constitutiva (housekeeping), a LP0 é essencial para a biogênese de ribossomos, a síntese proteica global e programas de crescimento celular e adaptação ao estresse ligados à função nucleolar. A perturbação de proteínas ribossômicas pode desorganizar o controle translacional e a proteostase, contribuindo para fenótipos semelhantes a ribossomopatias e para alterações de proliferação, apoptose e diferenciação em contextos relevantes para doenças. Em sistemas murinos, Rplp0 também é amplamente utilizado como gene de referência, o que torna sua interrupção direcionada informativa para avaliar estratégias de normalização e fenótipos dependentes de tradução.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein LP0 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rplp0 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rplp0, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rplp0 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ribosomal Protein LP0.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rplp0 para a investigação da sinalização de Ribosomal Protein LP0, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rplp0 críticos para a função Ribosomal Protein LP0
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rplp0 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Ribosomal Protein LP0 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Ribosomal Protein LP0 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rplp0. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Ribosomal Protein LP0 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Ribosomal Protein LP0 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rplp0 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rplp0 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.