REP-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417782

Descripción general

CHML codifica la proteína 2 escolta de Rab (REP-2), una chaperona citosólica que se une a las GTPasas Rab recién sintetizadas y las presenta a la geranilgeraniltransferasa de Rab para su prenilación, una modificación lipídica necesaria para la asociación a membranas. Mediante este paso de maduración de Rab, REP-2 sostiene vías de tráfico vesicular que incluyen el transporte endosomal y del Golgi, la exocitosis y la dinámica de membranas relacionada con la autofagia. La alteración de la prenilación de Rab o del ciclo de Rab puede perturbar la identidad de los orgánulos y la clasificación del cargamento intracelular, procesos que con frecuencia se han implicado en la neurodegeneración, trastornos de la retina y fenotipos más amplios de estrés celular relacionados con defectos de tráfico. CHML también se estudia en contextos en los que la señalización dependiente de Rab y la remodelación de membranas se entrecruzan con la función de células inmunitarias y la biología de células cancerosas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO REP-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CHML en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CHML junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CHML tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína REP-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CHML para la investigación de la señalización de REP-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CHML críticos para la función de REP-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CHML para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido REP-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido REP-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CHML. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR REP-2 (h) y el plásmido HDR REP-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CHML para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CHML definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.