RANKL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423448

Übersicht

Das Mausgen **Tnfsf11** kodiert **RANKL**, einen Liganden der TNF-Superfamilie, der von stromalen Zellen der Osteoblastenlinie und von aktivierten Immunzellen exprimiert wird und über seinen Rezeptor **RANK (TNFRSF11A)** signalisiert, um Differenzierung, Aktivierung und Überleben von Osteoklasten zu steuern. Die RANKL–RANK-Bindung aktiviert **NF-κB**-, **MAPK**- und **NFATc1**-abhängige Transkriptionsprogramme, die für Knochenumbau, die Organogenese der Lymphknoten und den Austausch zwischen dendritischen Zellen und T‑Zellen zentral sind. Physiologisch wird die RANKL-Aktivität durch **Osteoprotegerin (OPG/TNFRSF11B)** ausgeglichen und trägt zur Kopplung von Immunaktivierung und Skelettumsatz bei. Eine Fehlregulation der RANKL-Signalgebung wird mit entzündlicher Knochenerosion, osteoporosebedingtem Knochenverlust und osteolytischen Tumor‑Knochen‑Interaktionen in Verbindung gebracht und macht RANKL zu einem wichtigen Ziel für mechanistische Studien der Osteoimmunologie.

Das RANKL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnfsf11-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnfsf11-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnfsf11 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RANKL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnfsf11-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RANKL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnfsf11-Exone abzielen, die für die RANKL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnfsf11-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RANKL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RANKL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnfsf11-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RANKL HDR-Plasmid (m) und RANKL HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnfsf11-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnfsf11-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.