Ral BP-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402752

Descripción general

RALBP1 codifica Ral BP-1 (también conocida como RLIP76), un efector multifuncional de RalA/RalB que conecta la señalización de pequeñas GTPasas con la endocitosis, la remodelación del citoesqueleto y el tráfico de membranas. Ral BP-1 interactúa con componentes de la internalización dependiente de clatrina y con complejos adaptadores para influir en el recambio de receptores y en la dinámica de las vesículas, y también contribuye a redes de respuesta al estrés mediante el transporte dependiente de ATP de conjugados de glutatión y metabolitos de xenobióticos. A través de estas actividades, RALBP1 afecta procesos como la migración celular, la progresión del ciclo celular y la resistencia celular al estrés oxidativo y electrofílico. Se ha descrito una expresión o señalización desregulada de RALBP1 en múltiples contextos de cáncer, y con frecuencia se estudia en relación con la invasión, vías asociadas a la metástasis y la tolerancia al estrés celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ral BP-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RALBP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RALBP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RALBP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ral BP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RALBP1 para la investigación de la señalización de Ral BP-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RALBP1 críticos para la función de Ral BP-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RALBP1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ral BP-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Ral BP-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RALBP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ral BP-1 (h) y el plásmido HDR Ral BP-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RALBP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RALBP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.