Rad54 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401750

Übersicht

RAD54L kodiert die humane, DNA-abhängige ATPase Rad54, einen Chromatin-Remodeler der SWI2/SNF2-Familie, der mit RAD51 zusammenwirkt, um die homologe Rekombination zu fördern. Rad54 stabilisiert und remodelliert präsynaptische RAD51-Filamente, stimuliert die Stranginvasion und unterstützt die Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen bei Replikationsstress; damit trägt es zur Genomstabilität und zur Funktionsfähigkeit von Zellzyklus-Checkpoints bei. Das Protein agiert innerhalb der Netzwerke der homologen Rekombination und der DNA-Schadensantwort und interagiert mit zentralen Reparaturfaktoren, um die Prozessierung von Rekombinationsintermediaten zu regulieren. Eine veränderte RAD54L-Aktivität ist relevant für Phänotypen chromosomaler Instabilität, die in der Krebsbiologie und in Modellen defekter DNA-Reparatur häufig untersucht werden.

Das Rad54 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAD54L-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAD54L-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAD54L nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rad54-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAD54L-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rad54-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAD54L-Exone abzielen, die für die Rad54-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAD54L-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rad54 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rad54 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAD54L-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rad54 HDR-Plasmid (h) und Rad54 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAD54L-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAD54L-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.