RABAPTIN-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403303

Übersicht

RABEP1 kodiert RABAPTIN-5, einen Rab5-Effektor, der den frühen endozytotischen Transport koordiniert, indem er das Andocken und die Fusion von Vesikeln an frühen Endosomen fördert. Über Interaktionen mit GTPasen der Rab5-Familie und der endosomalen Sortiermaschinerie trägt RABAPTIN-5 dazu bei, die Internalisierung von Rezeptoren, die Entscheidung zwischen Recycling und Abbau von Fracht sowie die Reifung von Endosomen zu regulieren. Diese Prozesse beeinflussen die Signalweitergabe von Zelloberflächenrezeptoren und den Umsatz von Membranproteinen und verknüpfen die Funktion von RABEP1 mit Signalwegen, die Wachstumsfaktor-Signalisierung, Nährstoffaufnahme und Membranhomöostase steuern. Eine Dysregulation der endozytotischen Kontrolle und des Rab5-abhängigen Transports wurde mit veränderten Signaldynamiken und zellulären Phänotypen in Modellen der Krebsbiologie und neurodegenerationsrelevanten Modellen in Verbindung gebracht.

Das RABAPTIN-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RABEP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RABEP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RABEP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RABAPTIN-5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RABEP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RABAPTIN-5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RABEP1-Exone abzielen, die für die RABAPTIN-5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RABEP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RABAPTIN-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RABAPTIN-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RABEP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RABAPTIN-5 HDR-Plasmid (h) und RABAPTIN-5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RABEP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RABEP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.