Rab GDI α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404659

Visão geral

GDI1 codifica o inibidor de dissociação de GDP de Rab alfa (Rab GDI α), uma chaperona citosólica que se liga a Rab GTPases preniladas e regula a sua extração das membranas, solubilização e reciclagem entre compartimentos doadores e aceitadores. Ao controlar a disponibilidade e a localização das Rab, o Rab GDI α ajuda a coordenar o brotamento, o tráfego e a fusão de vesículas nas vias endocítica e secretora, sustentando a identidade dos organelos e a triagem de cargas. A disfunção de GDI1 perturba redes de tráfego dependentes de Rab que são críticas para o ciclo das vesículas sinápticas e para a homeostase neuronal, associando alterações no transporte de membranas a fenótipos de doenças do neurodesenvolvimento e neurológicas. Enquanto nó central na regulação de pequenas GTPases, o GDI1 é frequentemente estudado no contexto da dinâmica dos endossomas, do transporte do Golgi para a membrana plasmática e da função sináptica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rab GDI α (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GDI1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GDI1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GDI1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rab GDI α.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GDI1 para a investigação da sinalização de Rab GDI α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GDI1 críticos para a função Rab GDI α
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GDI1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Rab GDI α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Rab GDI α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GDI1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Rab GDI α Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Rab GDI α (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GDI1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GDI1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.