Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 25 (h): sc-404721

Présentation

RAB25 code Rab25, une petite GTPase de la famille Rab qui régule le bourgeonnement, le trafic et le recyclage des vésicules, avec des rôles importants dans le transport vers la membrane apicale et le tri endosomal. En contrôlant la livraison des cargos et le recyclage des récepteurs, Rab25 influence la polarité épithéliale, le renouvellement des intégrines et la propagation des signaux via des voies liées à l’adhésion et à la migration cellulaires. Une expression altérée de RAB25 et des circuits de trafic perturbés ont été associés, de manière dépendante du contexte, à la biologie tumorale, notamment via des effets sur l’invasivité et l’adaptation métabolique. En tant que nœud du trafic intracellulaire, Rab25 est également pertinent pour étudier la dynamique membranaire, l’organisation des jonctions serrées et la signalisation dépendante des récepteurs dans des cellules humaines polarisées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 25 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RAB25 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RAB25, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RAB25 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rab 25.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RAB25 pour l'étude de la signalisation de Rab 25, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RAB25 essentiels à la fonction de Rab 25
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RAB25 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rab 25 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rab 25 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RAB25. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rab 25 plasmide HDR (h) et le Rab 25 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RAB25 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RAB25 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.