PTN Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-422498-KO-2

Panoramica

Ptn codifica la pleiotrofina (PTN), un fattore di crescita secreto e legante l’eparina che modula la comunicazione cellula–cellula e cellula–matrice durante lo sviluppo e il rimodellamento dei tessuti. La PTN segnala attraverso interazioni con fosfatasi tirosiniche recettoriali e altri partner di superficie, influenzando cascate di fosforilazione, la crescita dei neuriti, la migrazione cellulare e programmi di sopravvivenza, inclusi processi legati a MAPK/ERK e PI3K/AKT. In modelli murini, la PTN è implicata nel patterning del neurosviluppo, nelle risposte angiogeniche e nella regolazione dei microambienti infiammatori, con un’espressione alterata riportata in diversi contesti di lesione e di segnalazione proliferativa. Queste funzioni rendono Ptn un nodo utile per analizzare gli input extracellulari dei fattori di crescita che plasmano il comportamento di linea, la connettività sinaptica e il crosstalk tra stroma e sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PTN (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ptn in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ptn insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ptn a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PTN.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ptn per lo studio della segnalazione di PTN, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ptn critici per la funzione di PTN
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ptn per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PTN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PTN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ptn. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PTN Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PTN (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ptn per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ptn definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.