PSIP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404589

Panoramica

PSIP1 (noto anche come LEDGF/p75) è un cofattore trascrizionale associato alla cromatina che, tramite il suo dominio PWWP, si lega ai geni attivi marcati da H3K36me3 e contribuisce a organizzare l’elongazione della trascrizione, il processamento dell’RNA e le risposte al danno al DNA. Interagendo con fattori coinvolti nello stress replicativo e nella riparazione delle rotture a doppio filamento, PSIP1 contribuisce alla stabilità del genoma e alla sopravvivenza cellulare in condizioni genotossiche. PSIP1 è inoltre noto per ancorare l’integrasi virale alla cromatina, influenzando la scelta dei siti di integrazione, e partecipa a programmi regolatori legati alla trascrizione oncogenica e alla segnalazione dello stress cellulare. La deregolazione delle interazioni cromatiniche associate a PSIP1 è stata studiata in contesti quali le neoplasie ematologiche e altri tumori, in cui risultano alterati il controllo trascrizionale e l’equilibrio delle vie di riparazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PSIP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PSIP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PSIP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PSIP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PSIP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PSIP1 per lo studio della segnalazione di PSIP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PSIP1 critici per la funzione di PSIP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PSIP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PSIP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PSIP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PSIP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PSIP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PSIP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PSIP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PSIP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.