POMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (r): sc-437377

概要

プロオピオメラノコルチン（POMC）は神経内分泌系のプロホルモン前駆体であり、プロテアーゼによる切断を受けて、ACTHやメラノコルチン類を含む複数の生理活性ペプチドへと加工される。これらはストレス軸シグナル伝達、エネルギーバランス、色素沈着、疼痛感受性の調節に関与する。ラットの視床下部および下垂体系の経路において、POMC由来ペプチドはメラノコルチン受容体を介して作用し、栄養およびホルモンの情報を統合して摂食行動と代謝恒常性を制御する。POMCの発現は発生段階および刺激応答性の転写プログラムによって厳密に制御されており、POMCの加工やシグナル伝達の変化は、肥満に関連する表現型、HPA軸応答の異常、内分泌機能障害に関与すると考えられている。神経ペプチド生合成とGPCR介在性シグナルの中心的な結節点として、POMCは神経内分泌細胞のアイデンティティ、ペプチド成熟、全身生理の研究に広く用いられている。

POMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）は、rat細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、POMCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、POMCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• POMCの機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• POMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）およびPOMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  POMC HDRプラスミド（r）および POMC HDRプラスミド（r2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。