POMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400592

概要

POMC（プロオピオメラノコルチン）は分泌性のプロホルモンをコードしており、プロテアーゼによる切断（プロセシング）を受けて、ACTHやメラノサイト刺激ホルモン（MSH）など複数の生理活性ペプチドへと変換されます。これらのペプチドは、内分泌ストレス応答シグナル、エネルギー恒常性、色素形成、侵害受容（痛みの感知）を協調的に制御します。下垂体のコルチコトロフでは、POMC由来ACTHがメラノコルチン受容体経路を介して副腎のステロイド産生を促進し、視床下部—下垂体—副腎（HPA）軸の活動を全身の代謝・免疫応答へと結び付けます。POMCのプロセシングは、制御された分泌経路でのトラフィッキングおよびプロホルモン変換酵素に依存し、cAMP/PKAシグナル伝達や神経内分泌分化プログラムと統合されています。POMC機能の異常または喪失は、副腎機能異常、肥満や過食といった表現型、ならびに神経内分泌・代謝研究に関わるメラノコルチンシグナルの変化と関連しています。

POMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPOMC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、POMC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、POMCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、POMCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、POMCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、POMC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• POMCの機能に不可欠なPOMCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、POMCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• POMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPOMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、POMC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  POMC HDRプラスミド（h）および POMC HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPOMCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPOMC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。