POLDIP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413603

Panoramica

POLDIP3 (polymerase delta interacting protein 3), noto anche come SKAR, è una proteina legante l’RNA che collega lo splicing dell’mRNA alla traduzione e supporta una sintesi efficiente delle proteine necessarie alla crescita cellulare. Agisce a valle della segnalazione mTOR, dove interazioni dipendenti dalla fosforilazione contribuiscono a coordinare l’inizio della traduzione e il reclutamento dei ribosomi sui trascritti sottoposti a splicing. POLDIP3 è stato inoltre associato alla regolazione delle vie di mantenimento del genoma attraverso interazioni con complessi di DNA polimerasi, integrando segnali proliferativi con processi legati alla replicazione. La disregolazione di queste reti di processamento dell’RNA e di controllo della crescita è rilevante per studi sulla trasformazione maligna, sulle risposte allo stress cellulare e sui disordini proliferativi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO POLDIP3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POLDIP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POLDIP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POLDIP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina POLDIP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POLDIP3 per lo studio della segnalazione di POLDIP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POLDIP3 critici per la funzione di POLDIP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POLDIP3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal POLDIP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal POLDIP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POLDIP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal POLDIP3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR POLDIP3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POLDIP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POLDIP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.