PNUTS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424580

概要

マウスPpp1r10はPNUTS（protein phosphatase 1 regulatory subunit 10）をコードしており、PNUTSはPP1をクロマチンおよびRNA関連複合体へと標的化し、リン酸化依存的な遺伝子発現制御を協調させる核内スキャフォールドとして機能します。PNUTSは転写制御、DNA損傷応答シグナル伝達、ならびに細胞周期チェックポイント制御に関与し、複製ストレスの管理やゲノム安定性の維持といった過程に影響を及ぼします。クロマチン構造の制御やRNAプロセシングに関わる因子との相互作用を通じて、PNUTSはリン酸化ダイナミクスを転写伸長およびRNA生合成へと結び付ける役割を担います。PP1–PNUTSシグナル伝達の破綻は、増殖プログラムの変化やゲノム不安定性表現型と関連づけられており、がん関連経路や神経生物学に関する機構研究の観点から重要です。

PNUTS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpp1r10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppp1r10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppp1r10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PNUTSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PNUTSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppp1r10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PNUTSの機能に不可欠なPpp1r10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppp1r10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PNUTS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPNUTS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppp1r10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PNUTS HDRプラスミド（m）および PNUTS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpp1r10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpp1r10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。