Plasmide CRISPR/Cas9 KO PNPase (h): sc-404406

Présentation

PNPT1 code la polyribonucléotide nucléotidyltransférase 1 (PNPase), une enzyme mitochondriale de maturation de l’ARN qui participe à l’activité exoribonucléase 3′–5′ et à la surveillance des ARN dans l’espace intermembranaire. PNPase contribue à l’expression des gènes mitochondriaux en régulant l’import et le renouvellement des petits ARN et en modulant la fonction du mitoribosome, influençant ainsi la capacité de phosphorylation oxydative et la bioénergétique cellulaire. Une altération de PNPT1 a été associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale, notamment des défauts d’activité de la chaîne respiratoire et des réponses au stress modifiées, liés à une perturbation du métabolisme des ARN mitochondriaux. Par conséquent, PNPT1 est fréquemment étudié dans des voies reliant l’homéostasie des ARN mitochondriaux, la signalisation de l’immunité innée déclenchée par des espèces d’ARN aberrantes, et des mécanismes impliqués dans des maladies neurodéveloppementales et métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PNPase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PNPT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PNPT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PNPT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PNPase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PNPT1 pour l'étude de la signalisation de PNPase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PNPT1 essentiels à la fonction de PNPase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PNPT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PNPase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PNPase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PNPT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PNPase plasmide HDR (h) et le PNPase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PNPT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PNPT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.