phostensin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407125

Panoramica

PPP1R18 codifica la phostensina, una subunità regolatoria associata all’actina che contribuisce a localizzare l’attività della proteina fosfatasi 1 (PP1) sul citoscheletro corticale. Accoppiando PP1 all’actina filamentosa, la phostensina partecipa al controllo della dinamica dei filamenti di actina, della forma cellulare e della segnalazione dipendente dall’adesione, con effetti a valle sulla motilità cellulare e sulla funzione delle cellule immunitarie. Questo ruolo di “scaffold” per PP1 collega PPP1R18 a processi di rimodellamento dipendenti dalla fosforilazione che coordinano l’organizzazione del citoscheletro e i complessi di segnalazione prossimali alla membrana. La disregolazione del targeting delle fosfatasi e del rimodellamento dell’actina è spesso rilevante per i fenotipi di migrazione e invasione delle cellule tumorali, così come per processi infiammatori e immuno-associati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO phostensin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PPP1R18 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PPP1R18 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PPP1R18 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina phostensin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PPP1R18 per lo studio della segnalazione di phostensin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PPP1R18 critici per la funzione di phostensin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PPP1R18 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal phostensin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal phostensin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PPP1R18. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal phostensin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR phostensin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PPP1R18 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PPP1R18 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.