Per1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401260
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Per1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Per1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Per1 Anticuerpo (E-8): sc-398890
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Per1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401260 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PER1 codifica la proteína Period 1, un componente central del reloj circadiano molecular que participa en bucles de retroalimentación de transcripción–traducción que controlan la expresión génica rítmica de 24 horas. PER1 interactúa con otros reguladores del reloj para modular la transcripción impulsada por CLOCK/ARNTL (BMAL1), conectando la temporización circadiana con el control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, el metabolismo y la señalización hormonal. A través de estas redes, PER1 influye en la coordinación temporal de las vías celulares de estrés y en la homeostasis mitocondrial y redox. La desregulación de la expresión o de la ritmicidad de PER1 se ha asociado con alteraciones de la fisiología sueño–vigilia y se ha descrito en estudios sobre biología del cáncer, trastornos metabólicos y mecanismos de enfermedades neuropsiquiátricas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Per1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PER1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PER1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PER1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Per1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PER1 para la investigación de la señalización de Per1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PER1 críticos para la función de Per1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PER1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Per1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Per1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PER1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Per1 (h) y el plásmido HDR Per1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PER1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PER1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.