Peptide YY Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403446

Panoramica

PYY codifica il peptide YY, un peptide endocrino di origine intestinale secreto principalmente dalle cellule enteroendocrine L in risposta all’assunzione di nutrienti e successivamente processato in forme bioattive che segnalano attraverso membri della famiglia dei recettori del neuropeptide Y, in particolare Y2. Il peptide YY modula la motilità e la secrezione gastrointestinale, nonché i segnali di sazietà all’interno dei circuiti dell’asse intestino–cervello, integrando i segnali enteroendocrini con le vie ipotalamiche e vagali. Attraverso questi processi mediati da recettori GPCR, PYY contribuisce all’omeostasi energetica e alla regolazione metabolica, e pattern di espressione alterati sono stati associati a obesità, diabete di tipo 2 e disturbi gastrointestinali. PYY è inoltre utilizzato come marcatore negli studi sulla differenziazione enteroendocrina e sulla biologia dell’epitelio intestinale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Peptide YY (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PYY in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PYY insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PYY a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Peptide YY.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PYY per lo studio della segnalazione di Peptide YY, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PYY critici per la funzione di Peptide YY
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PYY per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Peptide YY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Peptide YY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PYY. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Peptide YY Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Peptide YY (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PYY per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PYY definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.