PEPT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401259

Descripción general

SLC15A1 codifica PEPT1, un transportador apical de oligopéptidos acoplado a protones que media la captación de dipéptidos y tripéptidos dietarios y de una amplia gama de sustratos tipo peptídico a través de barreras epiteliales. La actividad de PEPT1 integra los gradientes transmembrana de H+ con la absorción de nutrientes, vinculando el transporte intestinal con la disponibilidad celular de aminoácidos y con procesos metabólicos y de respuesta al estrés aguas abajo. Su expresión es máxima en el intestino delgado y puede inducirse en otros epitelios ante perturbaciones inflamatorias o metabólicas, lo que influye en el flujo de sustratos en tejidos de barrera. La función desregulada de SLC15A1/PEPT1 se ha investigado en contextos que incluyen inflamación intestinal, fenotipos de malabsorción y alteraciones en el manejo de compuestos peptidomiméticos relevantes para la investigación en farmacología y toxicología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PEPT1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC15A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC15A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC15A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PEPT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC15A1 para la investigación de la señalización de PEPT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC15A1 críticos para la función de PEPT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC15A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PEPT1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PEPT1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC15A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PEPT1 (h) y el plásmido HDR PEPT1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC15A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC15A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.