Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-9 (h): sc-403899

Présentation

PAX9 code le facteur de transcription à boîte appariée Pax-9, un régulateur nucléaire se liant à l’ADN, essentiel à la mise en place des structures embryonnaires et à l’organogenèse. Pax-9 coordonne des programmes transcriptionnels qui gouvernent le développement cranio-facial et pharyngé, l’odontogenèse et les interactions épithélio-mésenchymateuses, en agissant au sein de réseaux génétiques du développement plus larges, incluant des facteurs de la famille PAX et des voies dépendantes des gènes homeobox. En génétique humaine, une altération de la fonction de PAX9 est fortement associée à l’agénésie dentaire congénitale et à des anomalies cranio-faciales connexes, ce qui en fait un locus majeur pour l’étude du contrôle transcriptionnel du développement. Dans des modèles cellulaires, Pax-9 constitue un point d’entrée expérimental pratique pour analyser la spécification des lignages, la régulation génique en réponse aux morphogènes et les cascades de différenciation en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-9 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PAX9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PAX9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PAX9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pax-9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PAX9 pour l'étude de la signalisation de Pax-9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PAX9 essentiels à la fonction de Pax-9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PAX9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pax-9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Pax-9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PAX9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pax-9 plasmide HDR (h) et le Pax-9 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PAX9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PAX9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.