Pax-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422120

Panoramica

Pax7 codifica Pax-7, un fattore di trascrizione della famiglia paired box che definisce e mantiene le cellule satelliti del muscolo scheletrico e coordina l’impegno della linea miogenica durante lo sviluppo e la rigenerazione. Pax-7 regola programmi di espressione genica che controllano l’autorinnovamento, la sopravvivenza e la differenziazione dei progenitori, e interagisce con reti di segnalazione come Notch e Wnt che modulano quiescenza e attivazione delle cellule staminali. Nei modelli murini, un’alterazione della funzione di Pax-7 compromette la dinamica della riparazione muscolare e l’omeostasi del pool di cellule satelliti, a supporto della sua rilevanza nello studio dei meccanismi alla base del deperimento muscolare, della rigenerazione compromessa e delle miopatie dello sviluppo. Pax-7 è inoltre utilizzato come marcatore e regolatore nella biologia neuromuscolare e negli studi sul destino cellulare, in cui il controllo trascrizionale della miogenesi rappresenta un endpoint chiave.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pax7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pax7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pax7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pax-7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pax7 per lo studio della segnalazione di Pax-7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pax7 critici per la funzione di Pax-7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pax7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pax-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Pax-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pax7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pax-7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Pax-7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pax7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pax7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.