PAFAH1B3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422104

Descripción general

Pafah1b3 codifica la subunidad catalítica PAFAH1B3, una fosfolipasa dependiente de serina que hidroliza el factor activador de plaquetas y fosfolípidos bioactivos relacionados. Al modular segundos mensajeros lipídicos, PAFAH1B3 contribuye a la homeostasis de membrana e influye en la señalización inflamatoria aguas abajo, las respuestas al estrés y las vías de remodelación metabólica. La alteración de la actividad de PAFAH1B3 se ha vinculado a cambios en la composición lipídica celular y en programas asociados a la proliferación, lo que respalda su relevancia en estudios sobre el metabolismo de células cancerosas y la regulación inmunitaria. En modelos murinos, Pafah1b3 ofrece un punto de entrada accesible para investigar el catabolismo de fosfolípidos y su impacto en la fisiología tisular y en la señalización lipídica asociada a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAFAH1B3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pafah1b3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pafah1b3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pafah1b3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAFAH1B3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pafah1b3 para la investigación de la señalización de PAFAH1B3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pafah1b3 críticos para la función de PAFAH1B3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pafah1b3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pafah1b3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAFAH1B3 (m) y el plásmido HDR PAFAH1B3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pafah1b3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pafah1b3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.