PACAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419000

Descripción general

Adcyap1 codifica el polipéptido activador de la adenilato ciclasa hipofisaria (PACAP), un neuropéptido conservado que señaliza principalmente a través de PAC1 (ADCYAP1R1) y otros GPCR de clase B relacionados para regular las vías de cAMP/PKA, MAPK/ERK y Ca²⁺ intracelular. En tejidos de ratón, PACAP modula la neurotransmisión, el neurodesarrollo, la secreción neuroendocrina y las respuestas celulares al estrés, influyendo en la plasticidad sináptica, la homeostasis circadiana e hipotalámica y la regulación autonómica. La señalización de PACAP se cruza con programas inflamatorios y metabólicos al modelar la liberación de citocinas y las señales de supervivencia celular en compartimentos neurales y periféricos. En la literatura, la desregulación del eje ADCYAP1/PACAP se ha vinculado con la neurobiología relacionada con el estrés, el procesamiento del dolor y mecanismos neuroinflamatorios, lo que respalda estudios mecanísticos en contextos relevantes para el sistema nervioso y el sistema inmune.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PACAP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adcyap1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adcyap1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adcyap1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PACAP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adcyap1 para la investigación de la señalización de PACAP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adcyap1 críticos para la función de PACAP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adcyap1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PACAP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PACAP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adcyap1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PACAP (m) y el plásmido HDR PACAP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adcyap1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adcyap1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.